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商品編號:53840
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快速過濾法質粒大量提取試劑盒(10preps)

價    格:910.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1512-01

狀    態:正常點擊量:861

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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試劑盒組分:
?
Catalog#
PD1512-01
Preps
10
ezBindTM Columns
10
Filter syringe(60 mL)
10
Buffer A1
110 mL
Buffer B1
110 mL
Buffer C1
135 mL
Buffer KB
110 mL
RNase A(20 mg/mL)
11 mg(550 μL)
Elution Buffer
30 mL
User Manual
1
?
保存條件:
?
?RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
?
注意事項:
  1. 質粒拷貝數:純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
  2. 轉化菌:若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 柱結合能力:1 mg
操作簡明步驟:
  1. 取100 μL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過 200 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  2. 加入10 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入12 mL Buffer C1, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。
  5. 將裂解液轉移至過濾器中,放在一個50 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來,對準50 mL的管向下壓,使裂解液盡可能多的通過,有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注:靜置10 分鐘時RNase A將工作,排除RNA污染。
  6. 加入12 mL 100% 乙醇,立即混勻,需馬上離心過DNA柱。
  7. 立即轉移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
  8. 可選: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
  9. 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室溫下>2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
  10. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。
  11. 將離心柱轉至一個新的50 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL滅菌ddH2O(pH在7.0-8.5之間)或Elution Buffer,室溫放置1分鐘,5,000 x g離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。若想提高得率,將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間,5,000 x g離心5分鐘以洗脫質粒DNA。

操作流程:





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