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商品編號:53855
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無內毒素小量質粒提取試劑盒I(250preps)

價    格:1725.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1212-02

狀    態:正常點擊量:827

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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試劑盒組分:
?
Catalog #
PD1212-02
Preps
250
ezBind Columns
250
Buffer A1
125 mL
Buffer B1
125 mL
Buffer N3
175 mL
Buffer KB
135 mL
DNA Wash Buffer*
54 mL
EndoClean Buffer
40 mL
Endofree Eluiton Buffer
30 mL
RNase A(20 mg/mL)
12.5 mg(625 μL)
User Manual
1
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保存條件:
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RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
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注意事項:
  1. 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
  2. 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 切勿直接取凍存的菌種進行培養。
操作簡明步驟:
  1. 接種新鮮的單個菌落到3-12 mL的LB培養基 (含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。
  2. 室溫下10,000 x g離心1分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  3. 加入450 μL Buffer A1 (確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保菌體充分懸浮。
  4. 加入 450 μL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  5. 加入100 μL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。
  6. 將離心管轉至高速離心機,在室溫下13,000 rpm離心10分鐘(若上清中仍有白色沉淀,可翻轉后再次離心5分鐘)
  7. 定量吸取離心后的上清液至新的1.5mL管中,加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混勻后冰浴10分鐘,其間不時搖勻(EndoClean Buffer粘稠難吸,可將槍頭剪掉頭后再吸取)
  8. 室溫下(冰浴取出后務必使溶液溫度恢復到23oC以上,否則溶液不分層,為保證分層效果,可直接在65oC溫育5分鐘)13,000 rpm離心10分鐘。此時溶液分為兩層,上層水相含有質粒,下層紅色有機相含有無內毒素。
  9. 將上層水相轉移至一個新的2.0 mL管中,加入450 μL的Buffer N3及400 μL的100% ethonal,用手用力甩3次以混勻。
  10. 將溶液700 μL轉移至帶有收集管的DNA柱中,室溫下13,000 rpm 離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復此步驟至全部溶液轉移至DNA柱中。
  11. 可選: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
  12. 向離心柱中加入650 μL DNA Wash Buffer (確保已加入無水乙醇)室溫下,13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“12”。
  13. 將離心柱放回高速離心機中,13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。
  14. 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中,向DNA柱的正中間加入50~100 μL (體積>50 μL) 的Endofree Elution Buffer,洗脫質粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間,室溫放置1分鐘,13,000 rpm 離心1分鐘,收集洗脫液到同一個離心管中。

操作流程:





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