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商品編號:53858
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無內毒素質粒中量提取試劑盒(25preps)

價    格:1220.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1415-02

狀    態:正常點擊量:993

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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試劑盒組分:
?
Catalog #
PD1415-02
Preps
25
EzBindTM Columns
25
Buffer A1
70 mL
Buffer B1
70 mL
Buffer N3
100 mL
Buffer KB
85 mL
EndoClean? Buffer
25 mL
RNase A (20 mg/mL)
7 mg(350 μL)
Endofree Eluiton Buffer
50 mL
User Manual
1
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保存條件:
?
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
?
注意事項:
  1. 質粒拷貝數:純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同體積的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
  2. 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 切勿直接取凍存在4oC的菌進行培養。
  4. 柱結合能力:250 μg
  5. 對富含內源核酸酶的宿主菌(endA+)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,請使用產品PD1712。
操作簡明步驟:
  1. 取50 μL新鮮的菌液接種到15-50 mL (勿超過 50 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  2. 加入2.5 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入600 μL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。
  5. 將離心管轉至高速離心機,在室溫下13,000 x g 離心10分鐘(若上清中有白色沉淀,可再次離心)。
  6. 定量吸取離心后的上清液至新的15 mL管中(避免吸起沉淀),加入0.1 倍體積的EndoClean Buffer,混勻后冰浴10分鐘,其間不時搖勻(若EndoClean Buffer粘稠難吸,可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
  7. 室溫下(冰浴取出后務必使溶液溫度恢復到23oC以上,否則溶液不分層)13,000 x g離心10分鐘(也可在2,500 x g離心15 分鐘)。此時溶液分為兩層,上層水相含有質粒,下層紅色有機相含有內毒素。
  8. 將上層水相轉移至一個新的15 mL管中,加入3 mL的Buffer N3及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,該混合溶液需要需馬上進行過柱吸附操作。
  9. 立即轉移6.0 mL裂解液至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
  10. 可選: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
  11. 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“11”。
  12. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下> 2,500 x g開蓋離心10分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。
  13. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5 mL的Endofree Elution Buffer,室溫放置1分鐘,> 2,500 x g 離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。若想提高得率,可用洗脫得到的0.5 mL的Endofree Elution Buffer再洗脫一次,收集到新的離心管中。




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