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商品編號:53861
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無內毒素質粒大量提取試劑盒(10preps)

價    格:980.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1514-01

狀    態:正常點擊量:1004

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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試劑盒組分:
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Catalog #
PD1514-01
Preps
10
ezBindTM Columns
10
Buffer A1
110 mL
Buffer B1
110 mL
Buffer N3
160 mL
Buffer KB
110 mL
RNase A(20 mg/mL)
11 mg(550 μL)
EndoClean Buffer
25 mL
Endofree Elution Buffer
25 mL
User Manual
1
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保存條件:
?
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
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注意事項:
  1. 質粒拷貝數:純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同體積的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer。
  2. 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。切勿直接取凍存在4oC的菌進行培養。
  3. 柱結合能力:1 mg
  4. 對富含內源核酸酶的宿主菌(endA+)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,請使用產品PD1713。
操作簡明步驟:
  1. 取100 μL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過 200 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  2. 加入10 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保菌體充分懸浮。
  3. 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入2 mL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。
  5. 將離心管轉至高速離心機,在室溫下12,000 x g離心10分鐘(若上清中有白色沉淀,可再次離心)。
  6. 定量吸取離心后的上清液至新的50 mL管中(避免吸起沉淀),加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混勻后冰浴10分鐘,其間不時搖勻(若EndoClean Buffer粘稠難吸,可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
  7. 取出后65oC溫浴5分鐘,室溫下(務必使溶液溫度恢復到23oC以上,否則溶液不分層)12,000 x g離心10分鐘(也可在2,500 x g離心15分鐘)。此時溶液分為兩層,上層水相含有質粒,下層紅色有機相含有內毒素。
  8. 將上層水相轉移至一個新的50 mL管中,加入10 mL的Buffer N3及12 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,需馬上離心過DNA柱。
  9. 立即將20 mL裂解液/乙醇混合液轉移至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。將剩余溶液轉移至DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心5分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復直至所有的溶液通過DNA柱。
  10. 可選: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
  11. 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“11”。
  12. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下> 2,500 x g開蓋離心10分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。
  13. 將離心柱轉至一個新的50 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL的Endofree Elution Buffer,室溫放置1分鐘,5,000 x g 離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。若想提高得率,將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間,5,000 x g離心5分鐘以洗脫質粒DNA。




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