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商品編號:53883
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無內毒素快速質粒大量提取試劑盒(25preps)

價    格:2310.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1520-02

狀    態:正常點擊量:933

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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產品組成

Catalog #

PD1520-00

PD1520-01

PD1520-02

Preps

2

10

25

ezBindTM Columns

2

10

25

Buffer A1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer B1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer N3

8 mL

40 mL

85 mL

Buffer KB

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer RET

22 mL

110 mL

270 mL

RNase A(20 mg/mL)

2.2 mg

(110 μL)

11 mg

(550 μL)

27 mg

(1.35 mL)

Endofree Elution Buffer

5 mL

25 mL

60 mL

User Manual

1

1

1

注意事項:

1.?????? 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

2.?????? 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。

3.?????? 切勿直接取凍存的菌進行培養。

操作簡要步驟:

1.?? 100 μL新鮮的菌液接種150-200 mL (勿超過 200 mL)LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。

2.?? 加入10 mL Buffer A1確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。

3.?? 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?

4.?? 加入3 mL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。

5.?? 將離心管轉至高速離心機,在室溫下12,000 x g離心10分鐘(若上清中有白色沉淀,可再次離心)

6.?? 轉移上清液20 mL(不超過20 mL)至新的50mL離心管中,加入0.5倍體積的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入10 mL Buffer RET) 10 mL100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,需馬上離心過DNA柱。

7.?? 立即轉移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。將剩余溶液轉移至DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復直至所有的溶液通過DNA柱。

8.?? 可選:向離心柱中加入10 mL Buffer KB,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。

9.?? 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟9”

10.????? 將離心柱放回高速離心機中,室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。

11.????? 將離心柱轉至一個新的50 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL Endofree Elution Buffer,室溫放置1分鐘,> 2,500 x g離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。50 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘,> 2,500 x g離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。





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