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商品編號:53885
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過濾法無內毒素快速質粒大量提取試劑盒(25preps)

價    格:2530.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:PD1522-02

狀    態:正常點擊量:815

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

電     話:021-54461558

傳     真:021-54461657

等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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試劑盒組分:
?
Catalog #
PD1522-02
Preps
25
ezBindTM Columns
25
Filter syringe (60 mL)
25
Buffer A1
270 mL
Buffer B1
270 mL
Buffer N3
85 mL
Buffer KB
270 mL
Buffer RET
550 mL
RNase A(20 mg/mL)
27 mg(1.35 mL)
Endofree Elution Buffer
60 mL
User Manual
1
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保存條件:
?
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
?
注意事項:
  1. 質粒拷貝數:純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同體積的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
  2. 轉化菌:若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 柱結合能力:1 mg
  4. 對富含內源核酸酶的宿主菌(endA)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,請使用產品PD1713。
操作簡明步驟:
  1. 取100 μL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過 200 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  2. 加入10 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入2 mL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。
  5. 將裂解液轉移至過濾器中,放在一個50 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來,對準50 mL的管向下壓,使裂解液盡可能多的通過,有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注:靜至10 分鐘時RNase A將工作,排除RNA污染。若離心十分鐘后再用過濾器過濾更有利于去除蛋白。
  6. 向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入20 mL Buffer RET) 及10 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,需馬上離心過DNA柱。
  7. 立即轉移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。將剩余溶液轉移至DNA柱中,室溫下> 2,500 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復至所有的溶液通過DNA柱。
  8. 可選:向離心柱中加入10 mL Buffer KB,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
  9. 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室溫下> 2,500 x g離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
  10. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘,以徹底去除殘留的乙醇。
  11. 將離心柱轉至一個新的50 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL的Endofree Elution Buffer,室溫放置1分鐘,> 2,500 x g離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。將50 mL離心管中的洗脫液上柱再放置1分鐘,> 2,500 x g離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。





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