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商品編號:73647
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abs9232 BCA蛋白定量試劑盒

價    格:416

產    地:上海更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:absin型    號:abs9232

狀    態:正常點擊量:220

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愛必信(上海)生物科技有限公司

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描述

BCA法是理想的蛋白質定量方法,在堿性環境下蛋白質分子中肽鍵結構與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA特異地與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物,在562nm處有最大的光吸收值并與蛋白質濃度成正比,顏色的深淺與蛋白質的含量成正比,可以根據吸收值測定蛋白質濃度。該測定方法靈敏度高,操作簡單,試劑及其形成的顏色復合物穩定性俱佳,并且受干擾物質去垢劑等影響小。

產品特點
1、準確靈敏,線性范圍廣,BCA試劑的蛋白質測定范圍是20~2000ug/mL;
2、快速:45min內完成測定,比經典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3、不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響;
4、檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬氏亮藍,可以酶標板法或分光光度計法測定蛋白質濃度。
?
組分:
?品名500次2500次
BCA蛋白定量A液100mL125mL×4
BCA蛋白定量B液4mL10mL×2
5mg/mL BSA1mL1mL×5
使用方法
實驗流程:
1、BSA 標準品的稀釋
(1)取 10uL 5mg/mL BSA 標準品稀釋至 100uL,使其終濃度為 0.5mg/mL。蛋白樣品在什么溶液中溶解,BSA 應用相應的溶液稀釋。通常情況下,為了方便,可用蒸餾水稀釋。
(2)在 96 孔板中分別加入 0,1,2,4,8,16,20uL 稀釋后的標準品(0.5mg/mL BSA),加蒸餾水將溶液補至 20uL,得到的各點的濃度分別為:0,0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.5mg/mL BSA,建議每種濃度做 2~3 個復孔。
2、BCA 工作液的準備
(1)按下列公式計算所需要的 BCA 工作液體積;(標準曲線+未知樣品個數)×(重復次數)×(每個樣品所需的 BCA 工作液體積)=所需要BCA 工作液的總體積
例如:需要測定標準曲線和 3 個樣品的蛋白濃度,每個實驗重復 2 次,每次實驗需要 200uL工作液:(5 個標準曲線點+ 3 個樣品) × (2 次重復) × (0.2mL) = 3.2mL 工作液
(2)將 50 份 A 液與 1 份 B 液混合后得到工作液。
注意:當 B 液加入 A 液時,可看見濁度,輕輕晃動后消失,工作液為綠色。
3、樣品檢測
(1)在 96 孔板中加入適當體積的樣品,用蒸餾水將樣品體積補至 20uL。
4、在各孔(標準曲線孔和樣品孔)中分別加入 200uL BCA 工作液,37 度孵育 30min;
注:也可在室溫下放置 2h,或 60 度孵育 30min。BCA 法測定蛋白濃度時,吸光度會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應會因溫度升高而加快。
5、在 562nm 處測其吸光度值,繪制標準曲線。
(1)用酶標儀檢測各點的吸光度值,并記錄;
(2)用各點的吸光度值減去空白對照的吸光度值,并記錄;
(3)以 BCA 濃度為 X 軸,吸光度值為 Y 軸,計算回歸方程。Y=aX
(4)用樣本的吸光度值減去空白對照的吸光度值,并帶入回歸方程,計算出樣本濃度。如果樣本已進行稀釋,請乘以稀釋倍數。
性能
保存方法BCA蛋白定量試劑盒A、B應保存于2~8℃;5mg/mL BSA應保存于-20℃。
注意事項1、將A、B液恢復到室溫再使用,有利于提高檢測的靈敏度。若A液出現物質析出,請室溫平衡后,輕輕晃動,使其溶解后再使用。
2、蛋白標準請混勻后,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標準。
3、需酶標儀一臺,最佳檢測波長為562nm。并需96孔板。






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