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商品編號:54183
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高效轉染各種真核細胞1.5mL

價    格:2716.00

產    地:美國更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    號:GT1211-03

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上海妙駿生物科技有限公司

聯 系 人:言國英

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等     級: (第 11年)

性     質:生產型,

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可用于450次6-孔板或3.5mm培養皿的細胞轉染。

產品說明

GeneTran是一種新型的脂質體和多聚物混合的轉染試劑,可用于各種真核細胞系的質粒轉染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染,如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性,如HEK 293、小鼠淋巴細胞、昆蟲細胞(sf9, sf21, High-Five)。有無血清存在(0-20%)對轉染試劑的效果無影響。
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主要特點
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n? 高效轉染各種貼壁細胞。
n? 對胚胎干細胞和原代細胞有較高的轉染效率。
n? 對懸浮細胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細胞也有很高的轉染效率。
n? 在同類產品中具有更高的轉染效率和更低的毒性。
n? 有無血清存在(0-20%)對轉染試劑的效果無影響。
n? 可用于單個質粒或多個質粒共轉。
n? 轉染24-72小時后,有高的蛋白表達量。
n? 性價比高
n? 操作簡便
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保存條件
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GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存12個月。使用之前請先將試劑瞬時離心。
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質粒轉染步驟
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以下步驟是用于35mm培養皿或6孔培養板轉染真核細胞的。若用于其他規格培養皿的轉染,請參考表1的用量。所有的數據和體積都是每孔的用量。對于絕大多數的細胞系和原代細胞,質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合。有時優化條件也是必須的(參見質粒DNA轉染條件的優化,第5頁)。

A. 轉染貼壁細胞(35 mm培養皿或6孔培養板)
轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度。
1.?對于每一個轉染樣本,按如下比例配制轉染混合液:
2.5 ????μg??? 質粒DNA
5??????? μL??? GeneTran
x? ????? μL??? 無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)
??????????? 總體積100 μL
* 絕對不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清
2.?用槍頭吹打混勻,放置于室溫20-40min。
3.?將混合液加入細胞培養皿中,晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。
注:血清濃度對于轉染效果無影響,經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。
4.?在轉染后的18-48小時之間,對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可 檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達,請在轉染后4-5天收集培養液。
5.?如果要得到穩定細胞株,請在轉染24小時后按1:10傳代培養。
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B. 轉染懸浮細胞(35 mm培養皿或6孔培養板)
轉染時保證細胞超過90%的密度
1.?對于每一個轉染樣本,按如下比例配制轉染混合液:
2.5 ????μg??? 質粒DNA
5??????? μL??? GeneTran
X??? ??? μL??? 無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)
??????????? 總體積100 μL
*? 絕對不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清
2.?用槍頭吹打混勻,放置于室溫20-40分鐘。
3.?將混合液加入細胞培養皿中,晃動培養皿混勻培養液。放入CO2培養箱。
??? 注:血清濃度對于轉染效果無影響,經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。
4.?在轉染后的18-48小時之間,對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達,請在轉染后4-5天收集培養液。
5.?如果要得到穩定細胞株,請在轉染24小時后按1:10傳代培養。

表1各種細胞培養板轉染推薦用量
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培養皿/板
表面積(cm2
培養液(mL)
混合液(μL)
質粒(μg)
GeneTran
10cm
56
10
500
10
20-30 μL
60mm
21
3
150
3
6-9 μL
35mm
8
2
100
2.5
5-7.5 μL
6孔
9.5
2
100
2.5
5-7.5 μL
12孔
3.8
1
50
1
2-3 μL
24孔
1.9
0.5
25
0.5
1-1.5 μL
48孔
0.95
0.25
12.5
0.25
0.5-0.75 μL
96孔
0.32
0.1
5
0.1
0.2-0.3 μL

質粒轉染條件優化
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n? 前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞。
n? 對于C2C12肌肉細胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%,而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%:
6 ???????? μg??? 質粒DNA
12-18? μL??? ?GeneTran
X??????????μL??? 無血清DMEM(或其他無血清培養基, PBS, DPBS等)
????????? ??總體積100 μL
?
n? 對于其他細胞系,可參考以下方法優化條件:
A. 在35mm培養板中將質粒量增加到3μg,4μg和6μg。
B. 在35mm培養板中將GeneTran增加到15μL。
C. 如果轉染效率較高,但死細胞較多,可降低質粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時間到5-24小時。
D. 可按下表優化條件:
問題
DNA
GeneTran
細胞毒性
降到1-2 μg
降到2-3 μL
轉染效率低
對于難轉的細胞增加到4μg
增加到>1:4
對于特別難轉的細胞增加到6μg
增加到>1:4

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